多聚酶二抗在 IHC 实验中能显著提高显色信号

发表时间：2022-05-16

多聚酶二抗介绍

过氧化物酶标记的抗体方法于 1968 年推出，是大多数临床和研究中石蜡包埋组织抗体的首次实践应用（Nakane,1968）。然而常规的二抗-HRP 结合物每个 IgG 分子上最多能结合 3 个 HRP 分子。这种结合物的分子量能满足常规的 WB 和 Elisa 实验要求，但在检测目标蛋白分子量含量很低时，如果不通过额外的步骤来放大信号，会降低检测靶标所需的灵敏度。IHC 实验时尤为明显。

在过去的几十年中，IHC 实验用试剂和实验方案上的改进增加了这套检测系统的灵敏度。基于酶-抗-酶免疫复合物技术（PAP 和 APA-AP）（Sternberger et al., 1970）和标准的抗生物素蛋白 / 链霉抗生物素蛋白-生物素-复合物技术（ABC 或 SABC）以及标记的链霉素-生物素（LSAB）技术，再通过多聚酶结合，这种新方法使检测抗原的能力比之前提高好几倍。

然而 PAP 和 APA-AP 方法会形成巨大的骨架结构导致检测物质体积过大而容易发生遮蔽和位阻现象（如细胞核抗原的检测），使其难以进入到组织样品内部而导致灵敏度降低（for review see: Shi et al., 1999 and citations therein）。

人体内很多组织分布有生物素（维生素 H），它可以和 ABC/SABC 结合产生非特异性染色。同时为了减少实验步骤，加强信号，需要一种容易渗透到组织内部，降低非特异反应，并能提高信号强度的检测系统来代替传统的方法。

FineTest^®IHC Kits 采用了一种新的多聚酶二抗系统（包括 poly-HRP 羊抗兔 IgG 和 poly-HRP 羊抗小鼠 IgG）。更多的酶可以通过链接臂结构链接到单分子的抗体上，形成最合适的复合物结构，从而在免疫组化实验中提高信号强度，同时简化了实验程序。

各检测系统的差异：


abcam(ab209101) 多聚酶二抗，DAB 显色 1 分钟	FineTest^®多聚酶二抗，DAB 显色 1 分钟

市面常见的商品化产品，SABC 显色 1 分钟	FineTest^® 多聚酶二抗，DAB 显色 1 分钟

显色对比试验

原理示意图：

IHC 测试结果

分别进行了高浓度和低浓度的目标抗原 IHC 实验。其中一抗，多聚酶二抗和 DAB 试剂盒均来自FineTest^®。

较高浓度的目标抗原：

Antibodies	Dilution	Location	Cat. No.
Histone H3.3^(A)	1:150	Nucleus
PCNA^(B)	1:200	Nucleus
a-Tubulin^(C)	1:300	Cytoplasm, Cytoskeleton
GAPDH^(D)	1:500	Cytoplasm, Nucleus
Lamin A/C^(E)	1:400	Nucleus
VDAC1^(F)	1:400	Cell membrane, tochondrion
β-actin(monoclonal)^(G)	1:250	Cytoplasm, Cytoskeleton

较低浓度的目标抗原：

Antibodies	Dilution	Location	Cat. No.
TRX- 1^(H)	1:300	Cytoplasm, Nucleus
PXMP2^(I)	1:150	Peroxisome membrane
TTK^(J)	1:200	Cytoskeleton
MEK3^(K)	1:300	Cytoplasm, Nucleus
MAP3K3^(L)	1:300	Cytoplasm
HDAC5^(M)	1:250	Cytoplasm, Nucleus
P2RX7^(N)	1:250	Cell membrane